瑞士CAMAGSCANNER3薄层扫描仪岛津CS-9000双波长薄层扫描_生物学_自然科学_专业资料。瑞士CAMAGSCANNER3薄层扫描仪岛津CS-9000双波长薄层扫描

  第三章 药物的鉴别方法 概述:药物的鉴别试验(identification test)是根据 药物的分子结构、理化性质,采用化学、物理化学 或生物学方法来判断药物的真伪。 意义:药品质量检验工作中的首项任务,只有在药 物鉴别无误的情况下,进行药物的杂质检查、含量 测定等分析才有意义。 鉴别方法: ?化学鉴别法 ?仪器鉴别法(光谱法、色谱法) ?其他方法等 一、化学鉴别法 概念:化学鉴别法是根据药物与化学试剂在一定条 件下发生离子反应或官能团反应产生不同颜色,生 成不同沉淀,呈现不同荧光,释放不同气体,来判 断药物的真伪。 特点:化学鉴别法有一定的专属性和灵敏度,实验 成本低,应用广,且简便易行。无机药物阴阳离子 鉴别反应的专属性和灵敏度都比较高,化学鉴别法 是药物分析中最常用的鉴别方法,但专属性比仪器 分析法差。 (一)一般鉴别试验 一般鉴别试验(general identification test)是依据某一类药物的化学结构或理化 性质的特征,通过化学反应来鉴别药物的 真伪。对无机药物是根据其组成的阴离子 和阳离子的特殊反应;对有机药物则大都 采用典型的官能团反应。 通常一般鉴别试验仅供确认药物质量标准 中单一的化学药物,若为数种化学药物的混 合物或有干扰物质存在时,除另有规定外, 一般是不适用的。因此,一般鉴别试验只能 证实是某一类药物,而不能证实是哪一种药 物。 分类: 1.显色反应鉴别法 2.沉淀生成反应鉴别法 3.荧光反应鉴别法 4.气体生成反应鉴别法 1.显色反应鉴别法 (1)三氯化铁显色反应:含酚羟基或水解后产生酚 羟基的药物。 (2)异羟肟酸铁反应:芳酸及其酯类、酰胺类的药 物。 (3)茚三酮显色反应:化学结构中含有脂肪氨基的 药物。 (4)重氮化-偶合显色反应:含芳伯氨基或能产生 芳伯氨基的药物。 (5)氧化还原显色反应及其他颜色反应。 【示例】 有机氟化物鉴别方法 取供试品约7μ g,照氧瓶燃烧法进行有机 破坏,用水20ml与0.01mol/L氢氧化钠溶液6.5ml 为吸收液,待燃烧完全后,充分振摇,取吸收液 2ml,加茜素氟蓝试液0.5ml,再加12%醋酸钠的 稀醋酸溶液0.2ml,用水稀释至4ml,加硝酸亚铈 试液0.5ml,即显蓝紫色,同时做空白对照试验。 【示例 】 水杨酸鉴别方法 取供试品的稀溶液,加三氯化铁试液1滴,即显 紫色。 2.沉淀生成反应鉴别法 (1)与重金属离子的沉淀反应:在一定条件下,药 物和重金属离子反应,生成不同形式的沉淀。 (2)与硫氰化铬铵(雷氏铵盐)的沉淀反应:这类 药物多为生物碱及其盐,具有芳香环的有机碱及 其盐。 (3)其他沉淀反应 【示例】 氯化物的鉴别 取供试品溶液,加硝酸使成酸性后,加硝酸银 试液,即生成白色凝乳状沉淀。分离,沉淀加氨 试液即溶解,再加硝酸,沉淀复生成。 如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐,须 先加氨试液使成碱性,将析出的沉淀滤过除去, 取滤液进行试验。 3.荧光反应鉴别法 (1)药物本身可在可见光下发射荧光。 (2)药物溶液加硫酸使呈酸性后,在可见光下发射 荧光。 (3)药物和溴反应后,于可见光下发射出荧光。 (4)药物和间苯二酚反应后,发射出荧光及药物经 其他反应后,发射荧光。 4.气体生成反应鉴别法 (1)大多数的胺(铵)类药物、酰脲类药物以及某 些酰胺类药物:可经强碱处理后加热,产生氨气。 (2)化学结构中含硫的药物:可经强酸处理后,加 热,发生硫化氢气体。 (3)含碘有机药物:经直火加热,可生成紫色碘蒸 气。 (4)含醋酸酯和乙酰胺类药物:经硫酸水解后,加 乙醇可产生醋酸乙酯的香味。 (二)专属鉴别试验 药物的专属鉴别试验(specific identification test)是证实某一种药物 的依据,它是根据每一种药物化学结构的 差异及其所引起的物理化学特性不同,选 用某些特有的灵敏的定性反应,来鉴别药 物的真伪。 小结: 综上所述,一般鉴别试验是以某些类别药物的共 同化学结构为依据,根据其相同的物理化学性质进行 药物真伪的鉴别,以区别不同类别的药物。而专属鉴 别试验,则是在一般鉴别试验的基础上,利用各种药 物的化学结构差异,来鉴别药物,以区别同类药物或 具有相同化学结构部分的各个药物单体,达到最终确 证药物真伪的目的。 二、仪器鉴别法 药物的仪器鉴别法主要包括紫外–可见 光谱鉴别法、红外光谱鉴别法、薄层色谱法、 高效液相色谱法和气相色谱法等。 1.紫外–可见光谱鉴别法 概述:主要用于有机化合物的分析,有些有机药物 分子结构中由于含有在紫外可见光区能产生吸收的 基团,因而显示吸收光谱。可根据光谱上的特征吸 收,包括最大吸收波长(λmax)、吸收系数(E )、 1% 吸收度比值等参数进行鉴别。 1cm 特点:此法简单易行,应用范围广,使用频率高, 但因为吸收光谱比较简单,吸收曲线形状变化不大, 缺乏精细结构,故作鉴别的专属性远不如红外光谱 法。 常用的鉴别方法: (1)比较光谱的一致性:按照药品质量标准,将供 试品与对照品用规定溶剂分别配成一定浓度的供试 溶液,在规定波长区间绘制吸收曲线,比较光谱图 是否一致。 (2)比较光谱中最大吸收波长和相应吸光度的一致 性:按照药品标准,将供试品配制成相应供试液, 在规定条件下测定,与标准品溶液相比较二者的最 大吸收波长和吸光度,如果相同可初步判断是同一 种药物。 (3)比较最大吸收波长和最小吸收波长的一致性。 (4)比较最大、最小吸收波长和相应吸收光度比值 的一致性。 (5)药物经过化学处理后,测定其反应产物的吸收 光谱。 以上方法可以单独使用,也可以几个方法结合 起来使用,以提高方法的专属性。 【示例1】 布洛芬片的鉴别方法 取本品的细粉适量,加0.4%氢氧化钠溶液制 成每1ml 中含布洛芬0.25mg的溶液,滤过,取续滤 液,照紫外-可见分光光度法(附录Ⅳ A)测定,在 265nm与273nm的波长处有最大吸收,在245nm与 271nm 的波长处有最小吸收,在259nm的波长处有一 肩峰。 【示例2】 维生素B2 的鉴别方法 取含量测定项下的溶液,照紫外–可见分光光 度法(附录Ⅳ A)测定,在267nm、375nm、444nm的 波长处有最大吸收。375nm波长处的吸光度与267nm 波长处的吸光度比值应为 0.31~0.33;444nm波长 处的吸光度与267nm波长处的吸光度比值应为 0.36~0.39。 【示例3】 苯妥英钠的鉴别方法 取本品约10mg,加高锰酸钾10mg、氢氧化钠 0.25g 与水10ml,小火加热5分钟,放冷,取上清液 5ml,加正庚烷20ml,振摇提取,静置分层后,取 正庚烷提取液,照紫外-可见分光光度法(附录Ⅳ A) 测定,在248nm 的波长处有最大吸收。 2.红外光谱鉴别法 概述:红外光谱法是一种专属性很强、应用较广 (固体、液体、气体样品)的鉴别方法。有机药物 在红外光区有特征吸收,药物分子的组成、结构、 官能团不同时,其红外吸收光谱也不同,故可以作 为有机药物鉴别的依据。 适用对象:红外光谱法主要用于组分单一、结构明 确的原料药,特别适合于用其他方法不易区分的同 类药物,如磺胺类、甾体激素类和半合成抗生素类 药品。 特点:由于绘制红外光谱时受外界条件影响较大, 图谱容易发生变异,为确保鉴别结果准确,中国药 典不单独使用本方法进行鉴别,常与其他方法联合 应用进行鉴别。 常用的方法有: (1)标准谱图对照法:按照药典指定的条件绘制供 试品的红外吸收光谱,然后与《药品红外光谱集》 中的相应标准进行对比,比较是否一致,如果峰位、 峰形以及相对强度等都一致时,则可以判断二者是 同一物质。 (2)直接对比法:将供试品与相应的对照品在同样 条件下绘制红外吸收图谱,直接对比是否一致。 【示例】 丙磺舒的供试品与对照品红外吸收图谱基 本一致。 注意事项: ①固体药品在测定时,可能由于晶型的影响,致使 测定的光谱图与光谱集所收载的光谱图不一致,遇 此情况时,应按光谱集中各相应光谱图中备注的方 法进行预处理后,再行测定。 ②采用压片法时,影响图谱形状的因素较多,应注 意供试片的制备条件对图谱形状及各谱带的相对吸 收强度可能产生的影响。压片时,若样品(包括盐 酸盐)与溴化钾之间不发生离子交换反应,则采用 溴化钾作为制片基质。否则,盐酸盐样品制片时必 须使用氯化钾基质。 ③测定时应注意二氧化碳和水气等干扰,必要时, 应采取适当措施(如采用干燥氮气吹扫)加以改善。 ④仪器间分辨率的差异及不同的操作条件(如狭缝 程序,扫描速度等)可能影响药品光谱图的判断。 为了方便比照,在比照所测药品的光谱图与光谱集 所收载的药品的光谱图时,宜首先在测定药品所用 的仪器上录制聚苯乙烯薄膜的光谱图,并与光谱集 收载的聚苯乙烯薄膜的光谱图加以比较和校正。 ⑤本法对于多组分药物或存在多晶现象而又无可重 复转晶方法的药物不适用。 3.薄层色谱鉴别法 概述:薄层色谱法(TLC)简单易行,具有分析和 分离双重功能,适用范围日益扩大。在实际工作中, 一般采用对照品(或标准品)比较法。即供试品与 对照品分别按照中国药典规定,配制一定浓度的供 试品溶液与对照品溶液,在同一块薄层板上点样、 展开、显色,供试品应与对照品相应的位置上显相 同颜色的斑点。 【示例】 维生素C颗粒的鉴别方法 取本品细粉适量(约相当维生素C 10mg),加 水10ml,振摇使维生素C溶解,滤过,取滤液作为供 试品溶液;另取维生素C对照品,加水溶解并稀释制 成1ml中约含1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层 色谱法(附录Ⅴ B)试验,吸取上述两种溶液各 2μ l,分别点于同一硅胶GF254薄层板上,以乙酸乙 酯-乙醇-水(5︰4︰1)为展开剂,展开,晾干,立 即(1小时内)置紫外光灯(254nm)下检视。供试 品溶液所显主斑点的位置和颜色应与对照品溶液的 主斑点相同。 4.高效液相色谱法(HPLC)和气相色谱法(GC) 一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色 谱法或气相色谱法操作条件进行试验。要求供试品 和对照品色谱峰的保留时间应一致。鉴别时如果采 用含量测定方法的内标法时,可要求供试品溶液和 对照品溶液色谱图中药物峰的保留时间与内标物峰 的保留时间比值应相同。 【示例】 萘普待因片的高效液相色谱法鉴别方法 在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液 两主峰的保留时间应与对照品溶液相应两主峰的保 留时间一致。 岛津CS-9000 双波长薄层扫描仪 瑞士CAMAG SCANNER 3 薄层扫描仪 高效液相色谱鉴别法 气相色谱鉴别法 三、其他方法 纸色谱法由于分离效能低、分析时间长 等缺点,在药物鉴别中逐渐被薄层色谱法或 其他方法代替;在《中国药典》(2010年版) 中,对胰岛素、中性胰岛素注射液等采用生 物法进行鉴别;放射性药物用测定放射性核 素的半衰期和γ 射线能谱的方法进行鉴别。 四、药物鉴别方法新动向 1.仪器方法用于药物的鉴别数量大大增加,尤其是 红外光谱法和高效液相色谱法。 2.制剂广泛采用IR法鉴别。 3.鉴别条目简练,选择专属的方法进行鉴别,平均 每个品种收载2条左右。

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